Jurnal Praktikum Kimia Organik I Percobaan VIII

I.     Judul                       : Kromatografi Lapis Tipis dan Kolom

II.  Hari,tanggal            : Kamis, 18 April 2019

III.             Tujuan             : Adapun tujuan dilakukannya percobaan ini adalah:

1.      Dapat mengetahui apa itu Kromatografi lapis tipis.

2.      Dapat memahami teknik-teknik dasar kromatografi lapis tipis dan kolom.

3.      Dapat memisahkan suatu senyawa dari campurannya dengan kromatograf lapis tipis dan memurnikannya dengan kolom.

IV.             Landasan Teori

Kromatografi merupakan salah satu cara pemisahan campuran dari senyawanya menjadi komponen yang berdasarkan perbedaan sifat fisik masing-masing komponen. Alat yang digunakan terdiri dari kolom yang mana diisi dengan fasa stasioner baik berupa padatan atau cairan. Campuran yang akan dipisahkan dimasukkan kedalam kolom dari ujung saty dan campuran akan bergerak kedalam dengan bantuan fasa gerak yang cocok. Pemisahan dicapai oleh perbedaan laju turun masing-masing komponen dalam kolom, yang ditentukan oleh kekuatan adsorbsi atau koefisien partisi antara fase diam (Tauechi, 2009).

Dalam semua teknik kromatografi, zat-zat yang terlarut akan bermigrasi sepanjang kolom, contohnya dalam kromatografi kertas atau lapis tipis, dan dasar pemisahannya terletak dalam laju pemiindahan yang berbeda setiap larutan. Kita boleh menganggap laju perpindahan sebagai hasil dari dua faktor yang satu cenderung menggereakkan zat terlarut itu dan yang lain menahannya. Perbedaan yang kecil antara zat terlarut dalam kekuatan adsorpsi dan interaksinya dengan pelarut yang bergerak menjadi dasar pemisahan bila molekul-molekul zat terlarut itu berulang kali menyebar, diantara dua fase itu keseuruhan panjang kolom (Underwood, 2002).

Pada kromatografi lapis tipis, bahan penyerap yang diletakkan akan menyebar pada plat kaca. Alumunium ataupun plastik. Penerapan TLC diawali dengan penyerapan plat dengan suspensi bahan penyerap. Larutan sampel dengan dalam pealrut yang mudah menguap disiapkan dan ditotolkan diatas plat dengan konsentarsi yang cukup. Identifikasi senyawa dilakukan dengan menghitung dan membandingkan harga Rf. Semua zat yang terpisah dengan Rf zat autentik. Untuk ketelitian adakalanya campuran sengaja di beri zat autentik dan dikembangkan sekaligus. Kromatografi kolom merupakann teknik penting untuk pemisahan skala preparatif dari beberapa mg sampai puluhan gram (Fitryan, 2011).

Menurut Respati (2014), hal terpenting dari suatu kromatografi adalah fase stasioner dan fase mobile. Kromatografi dibagi menjadi beberapa jenis jika dilihat pada jenis fase mobil dan mekanisme pemisahannya :

1.      Fase Mobile : Kromatografi Cair, Kromatografi Gas, Adsorbsi dan Pertisi.

2.      Mekanisme : Kromatografi Pertukaran Ion dan Kromatografi Gel

3.      Fase Stasioner : Kromatografi Kolom, Lapis Tipis dan Kertas.

Didalam Kromatografi, prinsip pemisahannya berdasarkan pada komponen penyusun suatu zat yang dimana terletak pada perbedaan afinitas atau gaya adhesi dari setiap jenis analit terhadap fasa diam dan fasa gerak yang mana akan menyebabkan masing-masing komponennya terpisah satu sama lain. Semakin kuat adsorbsi suatu analit terhadap fasa diam serta jika kelarutan yang kecil terhadap fasa gerak, maka waktu tinggalnya dalam kolom lebih lama dibandingkan dengan analit yang adsorbsinya lemah dan kelarutan tinggi (Syamsurizal, 2019 http://syamsurizal.staff.unja.ac.id/2019/04/10/325teknik-pemisahan-dengan-khromatografi/ ).

V.      Alat dan Bahan

5.1  Alat

·      Plat TLC

·      Gelas Piala

·      Pipet Tetes

·      Alat Kromatografi Kolom

·      Gelas ukur

5.2  Bahan

·      Etanol

·      Metanol

·      Klorofom

·      Etil asetat

·      N-heksan

·      Aseton

·      Ekstark tanaman

·      Aquades

·      Glass Wool

·      Silika gel

VI.   Prosedur Kerja

A. Kromatografi Lapis Tipis

- Siapkan Plat TLC

- Dibuat larutan pengembang dalam gelas piala 1L  dengan komposisi Etanol : Metanol : Kloroform     : Etil- Asetat : n-heksan : Aseton ( 40 : 68 : 108 : 115 : 140 : 152 ) ml

- Dibuat 10 larutan sampel daari 10 ekstrak tanaman dengan 5 ml metanol

- Masing- masing diambil larutan sampel yang sudah di ekstrak dibubuhkan ( ditotolkan ) diatas pelat TLC dengan jarak kira-kira 1cm dari tepi pelat kaca.

-Keringkan noda sampel dan standard dengan dryer (ditiup)

- Masukkan pelat ke dalam bejana pengembang

- Biarkan proses ini berlangsung sampai garis dmencapai 1 cm dari tepi atas pelat

- Angkat pelat dari bejana, lihat noda dengan lampu UV atau dibuat larutan dengann serium sulfat

- Hitung dan bandingkan semua Rf yang diperoleh.

B. Kromatografi Kolom

- Siapkan 10 ekstrak daun

- Siapkan kolom kromatografi

- Sumbat bagian bawah kolom dengan glass wool

- Dimasukkan silika gel kedalam larutan pengembang yang telah dibuat di awal

- Larutan tersebur kemudian dimasukkan kedalam kromatografi kolom

- Dimasukkan sampel yang akan di kromatografi

- Pelarut harus terus- menerus diteteskan kedalam kolom

- Tetesan yang keluar dari kolom ditampung dengan beberapa tabung reaksi bersih dan dipisahkan berdasarkan warnanya.

Link Video :
https://www.youtube.com/watch?v=kQ1TxvFDLB8

Pertanyaan :
1. Kromatografi Kolom digunakan untuk apa?
2. Fase gerak dan fase diam apa yangdigunakan pada kromatografi kolom?
3. Bagaimana cara membuat fase diam?